Biomarker Script Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

目錄: RK02002

規(guī)格: 100 RXN

BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit是一款專門用于反轉(zhuǎn)錄實驗的試劑盒，包含了BiomarkerScript II逆轉(zhuǎn)錄酶和兩種逆轉(zhuǎn)錄的引物。

BiomarkerScript II逆轉(zhuǎn)錄酶是一種重組M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶，擁有較低的RNase H活性同時兼具增強(qiáng)的熱穩(wěn)定性。與野生型M-MuLV相比，重組M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶可以在更高的溫度下合成第一鏈cDNA。該酶在高達(dá)48?℃時仍具有活性，特異性和cDNA產(chǎn)量更高。

運(yùn)輸方式：干冰運(yùn)輸。

保存方式：-80~-20℃避光保存。

• 廣泛的模板兼容性

可兼容不同物種，包括動物（小鼠、人、雞、鴿子等）、植物（玉米、水稻、番茄等）樣本。

• 熱穩(wěn)定性強(qiáng)

BiomarkerScript II逆轉(zhuǎn)錄酶是一種重組M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶，擁有較低的RNaseH活性同時兼具增強(qiáng)的熱穩(wěn)定性。

圖1：以1 μl人肝癌細(xì)胞RNA為模板，用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，得到cDNA產(chǎn)物。再以100 ng cDNA為模 板，用Biomarker HS 2× HF Master Mix進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將得到的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳.

結(jié)果所示：擴(kuò)增條帶單一且產(chǎn)量高。

• 高反轉(zhuǎn)錄酶的活性

該酶在高達(dá)48 ℃時仍具有活性，而且特異性和cDNA產(chǎn)量更高。較高溫度下進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，

能夠減少RNA的二級結(jié)構(gòu)，增加反轉(zhuǎn)錄的效率。

• 擴(kuò)增更長cDNA

BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit可擴(kuò)增長達(dá)10 kb的cDNA，用于基因克隆。

1.cDNA第一鏈的合成。

2.反轉(zhuǎn)產(chǎn)物適用于qPCR實驗。

3.反轉(zhuǎn)產(chǎn)物適用于基因克隆。

4.cDNA文庫構(gòu)建。

Q1：cDNA產(chǎn)量低？

A1: 1）模板RNA降解，或者濃度過低。通過變性瓊脂糖凝膠電泳檢查RNA的完整性。

2）小分子化合物污染RNA模板?？梢砸掖汲恋?，然后70％乙醇洗滌可以除去大多數(shù)污染物，例如EDTA和胍類；用氯化鋰沉淀可以去除多糖。

3）蛋白污染RNA模板。苯酚/氯仿提取和乙醇提取可以去除蛋白污染，如蛋白酶。一些靶RNA可能包含RT的強(qiáng)終止序列。

4）建議使用隨機(jī)引物而不是d(T)₂₃VN。

Q2：mRNA可以用于逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)嗎？

A2: 總RNA或mRNA都可用于逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，通?？俁NA足以進(jìn)行大多數(shù)RT-PCR分析。